高效液相色譜儀主要由色譜泵及控制器、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器和數(shù)據(jù)處理及控制五大部分組成,分離原理是一個(gè)物理過(guò)程,流動(dòng)相攜帶著待分析化合物和其他一些共存物質(zhì)流過(guò)色譜柱,利用不同物質(zhì)在固定相上的保留時(shí)間不同,從而出峰時(shí)間不同而達(dá)到分離,利用保留時(shí)間定性,峰高或者峰面積定量,在將分離后的各個(gè)成分依次通過(guò)一紫外檢測(cè)器時(shí)就可檢測(cè)出各化合物的濃度來(lái)。
高效液相色譜法有“三高一廣一快”的特點(diǎn):
1、高壓:流動(dòng)相為液體,流經(jīng)色譜柱時(shí),受到的阻力較大,為了能迅速通過(guò)色譜柱,必須對(duì)載液加高壓。
2、高效:分離效能高??蛇x擇固定相和流動(dòng)相以達(dá)到分離效果,比工業(yè)精餾塔和氣相色譜的分離效能高出許多倍。
3、高靈敏度:紫外檢測(cè)器可達(dá)0.01ng,進(jìn)樣量在μL數(shù)量級(jí)。
4、應(yīng)用范圍廣:百分之七十以上的有機(jī)化合物可用高效液相色譜分析,特別是高沸點(diǎn)、大分子、強(qiáng)極性、熱穩(wěn)定性差化合物的分離分析,顯示出優(yōu)勢(shì)。
5、分析速度快、載液流速快:較經(jīng)典液體色譜法速度快得多,通常分析一個(gè)樣品在15~30 min,有些樣品甚至在5min內(nèi)即可完成,一般小于1h。此外HPLC還有色譜柱可反復(fù)使用、樣品不被破壞、易回收等優(yōu)點(diǎn)。